StIIR124C: un nuevo mutante para la caracterización del mecanismo de formación de poros de Sticholisina II en células

Autores/as

  • Aymé Castillo Martínez Centro de Estudio de Proteínas, Facultad de Biología, Universidad de La Habana (UH)
  • Haydeé Mesa Galloso Centro de Estudio de Proteínas, Facultad de Biología, Universidad de La Habana (UH)

Palabras clave:

citolisinas, proteína formadora de poros, mutantes de Cys, actividad hemolítica

Resumen

La Sticholisina II (StII) es una actinoporina producida por la anémona de mar
Stichodactyla helianthus (Anthozoa: Stichodactylidae). Su estructura tridi-
mensional se caracteriza por un núcleo central de hojas-β intercaladas
flanqueado por dos hélices-α, un sitio de unión interfacial y lazos que inter-
conectan las fibras β. El mecanismo de formación de poros de las actinopori-
nas transcurre mediante varias etapas dentro la que se encuentra: la unión a
la membrana, la oligomerización, el despliegue del extremo amino y final-
mente la formación del poro. Dicho mecanismo no ha sido completamente
dilucidado, fundamentalmente las bases moleculares de la etapa de oli-
gomerización. En general, las actinoporinas no poseen residuos de cisteínas
en su estructura primaria. La obtención de mutantes de cisteína permite el
marcaje con numerosas sondas fluorescentes o de espín específicas a los
grupos sulfidrilos (SH) para el estudio de la interacción proteína-membrana.
Esto impone la necesidad de obtener variantes mutadas de la proteína que
incorporen la cisteina a su estructura. En este trabajo, se obtuvo el mutante
StII R124C en el que se sustituyó el aminoácido Arg124, localizado hacia el
extremo carboxilo de StII, por un residuo de cisteína. StII R124C se expresó
en el sistema de Escherichia coli y se purificó en un solo paso mediante
cromatografía de intercambio catiónico. La actividad biológica de StII R124C
evaluada mediante la lisis de células eritrocitarias no mostró variación, lo
que sugiere que la sustitución de Arg124 por cisteína en StII recombinante no
afecta la capacidad formadora de poros de la proteína. Así, el mutante StII
R124C constituye una alternativa para la realización de estudios de relación
estructura-función

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Publicado

2023-02-02

Cómo citar

Castillo Martínez, A., & Mesa Galloso, H. (2023). StIIR124C: un nuevo mutante para la caracterización del mecanismo de formación de poros de Sticholisina II en células. Revista Cubana De Ciencias Biológicas, 6(1). Recuperado a partir de https://revistas.uh.cu/rccb/article/view/1219