Validación de método cromatográfico para determinar impurezas de la proteína recombinante del virus SARS-CoV-2

Resumen

La cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa es uno de los métodos más utilizados para la purificación, análisis y caracterización de proteínas. Como parte de la transferencia tecnológica de la técnica en los laboratorios de control de la calidad en Industrial Biotecnológico CIGB-Mariel fue necesaria la validación de la misma para el ingrediente farmacéutico activo de la proteína recombinante del dominio de unión a receptor del virus SARS-CoV-2. El objetivo de este trabajo es validar el método cromatográfico para la determinación de impurezas en la proteína recombinante del virus SARS-CoV-2. Para ello, se determinaron: especificidad, linealidad, precisión, robustez, idoneidad del sistema, límites de detección y cuantificación. La separación cromatográfica se logró en una columna C18 4.6×250 de 5 µm, la fase móvil se administró a un caudal de 1 mL/min con detección UV a 226 nm. Como resultado, el método analítico es capaz de detectar productos de degradación debido al tratamiento térmico, lo que demuestra su utilidad en los estudios de estabilidad. El método es preciso, ya que es capaz de reproducir los resultados con una variación menor que 2 % en diferentes días, analistas y sistemas. Es robusto, dado que ligeras modificaciones en las condiciones de corridas no afectan los resultados de las muestras analizadas y es lineal en el intervalo de 20 µg a 60 µg de proteína. Según los resultados y su comparación con los criterios de aceptación, se puede considerar validada la técnica.